Studio delle modificazioni post traduzionali della polimerasi eta

Le modifiche post-traduzionali (PTM) svolgono un ruolo importante nella regolazione del TLS. IN questo senso, polhη è l’ archetipico di questa regolamentazione che è stata dimostrata essere ubiquitilata, fosforilata, SUMoylata e O-GlcNAcylata. Siamo stati tra i primi a identificare l’ubiquitilazione e la fosforilazione come due segnali importanti che regolano il ruolo della polimerasi, modulando il suo reclutamento alle forche di replicazione bloccate, l’attivazione del bypass del danno e la stabilità della proteina durante il ciclo cellulare. Purtroppo, non sappiamo ancora precisamente come queste modifiche siano stabilite e riverite e loro ripercussioni sull’attività di polη. Questo progetto cerca di rispondere a queste domande valutando le PTM che influenzano la polimerasi tramite la gel bidimensionali 2D-PAGE (Fig1) e valutando la dinamica delle forche di replicazione nei mutanti dei residui che vengono modificati.

Fig1. 2D-PAGE gel

Valutiamo il destino e la stabilità della forca di replicazione mediante l’analisi delle fibre di DNA (Fig2) e analizziamo la sopravvivenza delle cellule in diverse condizioni sperimentali. Inoltre cerchiamo di identificare quali proteine siano coinvolte nella regolazione delle PTM e come influenzino l’attività di polη e della sintesi translesione nel suo complesso.

Fig2. Analisi della progressione della replicazione mediante fibre di DNA